तरल क्रोमैटोग्राफी द्वारा मात्रात्मक विश्लेषण के सिद्धांत और तरीके

तरल क्रोमैटोग्राफी का पृथक्करण तंत्र दो चरणों के मिश्रण में घटकों की आत्मीयता में अंतर पर आधारित है।

विभिन्न स्थिर चरणों के अनुसार, तरल क्रोमैटोग्राफी को तरल-ठोस क्रोमैटोग्राफी, तरल-तरल क्रोमैटोग्राफी और बंधुआ चरण क्रोमैटोग्राफी में विभाजित किया जाता है।फिलर के रूप में सिलिका जेल के साथ तरल-ठोस क्रोमैटोग्राफी और मैट्रिक्स के रूप में माइक्रोसिलिका के साथ बंधुआ चरण क्रोमैटोग्राफी का सबसे व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

स्थिर चरण के रूप के अनुसार, तरल क्रोमैटोग्राफी को स्तंभ क्रोमैटोग्राफी, पेपर क्रोमैटोग्राफी और पतली परत क्रोमैटोग्राफी में विभाजित किया जा सकता है।सोखने की क्षमता के अनुसार, इसे सोखना क्रोमैटोग्राफी, विभाजन क्रोमैटोग्राफी, आयन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी और जेल परमीशन क्रोमैटोग्राफी में विभाजित किया जा सकता है।

हाल के वर्षों में, पृथक्करण प्रभाव में सुधार के लिए उच्च दबाव में मोबाइल चरण प्रवाह को तेजी से बनाने के लिए तरल स्तंभ क्रोमैटोग्राफी प्रणाली में एक उच्च दबाव तरल प्रवाह प्रणाली जोड़ी गई है, इसलिए उच्च दक्षता (उच्च दबाव के रूप में भी जाना जाता है) तरल क्रोमैटोग्राफी उभर कर आया है।

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01 तरल क्रोमैटोग्राफी के मात्रात्मक विश्लेषण का सिद्धांत

गुणात्मक आधार पर मात्रा निर्धारण के लिए मानक के रूप में शुद्ध पदार्थों की आवश्यकता होती है;

तरल क्रोमैटोग्राफी परिमाणीकरण एक अपेक्षाकृत मात्रात्मक विधि है: अर्थात, मिश्रण में विश्लेषण की मात्रा का अनुमान शुद्ध मानक नमूने की ज्ञात मात्रा से लगाया जाता है।

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02 तरल क्रोमैटोग्राफी द्वारा परिमाणीकरण का आधार

मापे गए घटक (W) की मात्रा प्रतिक्रिया मान (A) (शिखर ऊंचाई या शिखर क्षेत्र), W=f×A के समानुपाती होती है।

मात्रात्मक सुधार कारक (एफ): यह मात्रात्मक गणना सूत्र का आनुपातिकता स्थिरांक है, और इसका भौतिक अर्थ इकाई प्रतिक्रिया मूल्य (शिखर क्षेत्र) द्वारा दर्शाए गए मापा घटक की मात्रा है।

मात्रात्मक सुधार कारक मानक नमूने की ज्ञात मात्रा और उसके प्रतिक्रिया मूल्य से प्राप्त किया जा सकता है।

अज्ञात घटक के प्रतिक्रिया मूल्य को मापें, और घटक की मात्रा मात्रात्मक सुधार कारक द्वारा प्राप्त की जा सकती है।

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03 मात्रात्मक विश्लेषण में सामान्य शब्द

नमूना (नमूना): क्रोमैटोग्राफ़िक विश्लेषण के लिए एक विश्लेषण युक्त समाधान।मानक और अज्ञात नमूनों में विभाजित।

मानक: ज्ञात सांद्रता वाला एक शुद्ध उत्पाद।अज्ञात नमूना (अज्ञात): वह मिश्रण जिसकी सांद्रता का परीक्षण किया जाना है।

नमूना वजन: परीक्षण किए जाने वाले नमूने का मूल वजन।

तनुकरण: अज्ञात नमूने का तनुकरण कारक।

घटक: मात्रात्मक रूप से विश्लेषण किया जाने वाला क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर, यानी वह विश्लेषण जिसकी सामग्री अज्ञात है।

घटक की मात्रा (राशि): परीक्षण किए जाने वाले पदार्थ की सामग्री (या एकाग्रता)।

पूर्णांकता: एक कंप्यूटर द्वारा क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर के शिखर क्षेत्र को मापने की कम्प्यूटेशनल प्रक्रिया।

अंशांकन वक्र: मानक पदार्थ की ज्ञात मात्रा से स्थापित घटक सामग्री बनाम प्रतिक्रिया मूल्य का एक रैखिक वक्र, जिसका उपयोग विश्लेषण की अज्ञात सामग्री को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

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04 तरल क्रोमैटोग्राफी का मात्रात्मक विश्लेषण

1. मात्रात्मक विश्लेषण के लिए उपयुक्त क्रोमैटोग्राफ़िक विधि का चयन करें:

एल पता लगाए गए घटक के शिखर की पुष्टि करें और 1.5 से अधिक रिज़ॉल्यूशन (आर) प्राप्त करें

एल परीक्षण किए गए घटकों की क्रोमैटोग्राफिक चोटियों की स्थिरता (शुद्धता) निर्धारित करें

एल विधि की पता लगाने की सीमा और परिमाणीकरण सीमा निर्धारित करें;संवेदनशीलता और रैखिक सीमा

2. विभिन्न सांद्रता के मानक नमूनों के साथ एक अंशांकन वक्र स्थापित करें

3. मात्रात्मक तरीकों की सटीकता और परिशुद्धता की जाँच करें

4. नमूना संग्रह, डेटा प्रोसेसिंग और रिपोर्ट परिणामों को लागू करने के लिए संबंधित क्रोमैटोग्राफी प्रबंधन सॉफ़्टवेयर का उपयोग करें

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05 मात्रात्मक शिखर की पहचान (गुणात्मक)

परिमाणित किए जाने वाले प्रत्येक क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर की गुणात्मक रूप से पहचान करें

सबसे पहले, मात्रा निर्धारित करने के लिए क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर के अवधारण समय (आरटी) को निर्धारित करने के लिए मानक नमूने का उपयोग करें।अवधारण समय की तुलना करके, अज्ञात नमूने में प्रत्येक क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर के अनुरूप घटक ढूंढें।क्रोमैटोग्राफ़िक गुणात्मक विधि मानक नमूने के साथ अवधारण समय की तुलना करना है।कसौटी अपर्याप्तआगे की पुष्टि (गुणात्मक)

1. मानक जोड़ विधि

2. एक ही समय में अन्य विधियों का उपयोग करें: अन्य क्रोमैटोग्राफ़िक विधियाँ (तंत्र बदलें, जैसे: विभिन्न क्रोमैटोग्राफ़िक कॉलम का उपयोग करना), अन्य डिटेक्टर (पीडीए: स्पेक्ट्रम तुलना, स्पेक्ट्रम लाइब्रेरी खोज; एमएस: मास स्पेक्ट्रम विश्लेषण, स्पेक्ट्रम लाइब्रेरी खोज)

3. अन्य उपकरण एवं विधियाँ

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06 मात्रात्मक शिखर संगति की पुष्टि

क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर संगति (शुद्धता) की पुष्टि करें

सुनिश्चित करें कि प्रत्येक क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर के नीचे केवल एक मापा घटक है

सह-उत्सर्जक पदार्थों (अशुद्धियों) से हस्तक्षेप की जाँच करें

क्रोमैटोग्राफ़िक पीक संगति (शुद्धता) की पुष्टि के लिए तरीके

फोटोडायोड मैट्रिक्स (पीडीए) डिटेक्टरों के साथ स्पेक्ट्रोग्राम की तुलना करना

चरम शुद्धता की पहचान

2996 पवित्रता कोण सिद्धांत

भाग 07 में आमतौर पर उपयोग की जाने वाली मात्रात्मक विधियाँ

मानक वक्र विधि, बाहरी मानक विधि और आंतरिक मानक विधि में विभाजित:

1. बाह्य मानक विधि: तरल क्रोमैटोग्राफी में सबसे अधिक उपयोग किया जाता है

मानक नमूनों के रूप में परीक्षण करने के लिए यौगिकों के शुद्ध नमूनों का उपयोग करके ज्ञात सांद्रता के मानक नमूनों की एक श्रृंखला तैयार की गई थी।कॉलम में उसके प्रतिक्रिया मूल्य (पीक क्षेत्र) तक इंजेक्ट किया गया।
एक निश्चित सीमा के भीतर, मानक नमूने की एकाग्रता और प्रतिक्रिया मूल्य, अर्थात् W= f×A के बीच एक अच्छा रैखिक संबंध होता है, और एक मानक वक्र बनाया जाता है।

बिल्कुल समान प्रायोगिक स्थितियों के तहत, मापे जाने वाले घटक का प्रतिक्रिया मूल्य प्राप्त करने के लिए अज्ञात नमूने को इंजेक्ट करें।ज्ञात गुणांक f के अनुसार, मापे जाने वाले घटक की सांद्रता प्राप्त की जा सकती है।

बाह्य मानक विधि के लाभ:सरल संचालन और गणना, यह आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली मात्रात्मक विधि है;प्रत्येक घटक का पता लगाने और उसका निराकरण करने की कोई आवश्यकता नहीं है;मानक नमूना आवश्यक है;मानक नमूने और अज्ञात नमूने की माप की स्थिति सुसंगत होनी चाहिए;इंजेक्शन की मात्रा सटीक होनी चाहिए.

बाह्य मानक पद्धति के नुकसान:प्रायोगिक स्थितियों का उच्च होना आवश्यक है, जैसे डिटेक्टर की संवेदनशीलता, प्रवाह दर और मोबाइल चरण की संरचना को बदला नहीं जा सकता;प्रत्येक इंजेक्शन की मात्रा में अच्छी पुनरावृत्ति होनी चाहिए।

2. आंतरिक मानक विधि: सटीक, लेकिन परेशानी भरा, मानक तरीकों में सबसे अधिक उपयोग किया जाता है

मिश्रित मानक बनाने के लिए आंतरिक मानक की एक ज्ञात मात्रा को मानक में जोड़ा जाता है, और ज्ञात एकाग्रता के कार्य मानकों की एक श्रृंखला तैयार की जाती है।मिश्रित मानक में मानक से आंतरिक मानक का दाढ़ अनुपात अपरिवर्तित रहता है।क्रोमैटोग्राफ़िक कॉलम में इंजेक्ट करें और प्रतिक्रिया मान के रूप में (मानक नमूना शिखर क्षेत्र/आंतरिक मानक नमूना शिखर क्षेत्र) लें।प्रतिक्रिया मूल्य और कार्य मानक की एकाग्रता के बीच रैखिक संबंध के अनुसार, अर्थात् W= f×A, एक मानक वक्र बनाया जाता है।

आंतरिक मानक की ज्ञात मात्रा को अज्ञात नमूने में जोड़ा जाता है और मापे जाने वाले घटक का प्रतिक्रिया मूल्य प्राप्त करने के लिए कॉलम में इंजेक्ट किया जाता है।ज्ञात गुणांक f के अनुसार, मापे जाने वाले घटक की सांद्रता प्राप्त की जा सकती है।

आंतरिक मानक विधि की विशेषताएं:ऑपरेशन के दौरान, नमूना और आंतरिक मानक को एक साथ मिलाया जाता है और क्रोमैटोग्राफिक कॉलम में इंजेक्ट किया जाता है, इसलिए जब तक मिश्रित समाधान में आंतरिक मानक के लिए मापा घटक की मात्रा का अनुपात स्थिर रहता है, नमूना मात्रा में परिवर्तन होता है मात्रात्मक परिणामों पर कोई प्रभाव नहीं पड़ेगा..आंतरिक मानक विधि नमूना मात्रा और यहां तक ​​कि मोबाइल चरण और डिटेक्टर के प्रभाव को ऑफसेट करती है, इसलिए यह बाहरी मानक विधि की तुलना में अधिक सटीक है।

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मात्रात्मक विश्लेषण परिणामों को प्रभावित करने वाले 08 कारक

ख़राब सटीकता निम्न कारणों से हो सकती है:

गलत शिखर क्षेत्र एकीकरण, नमूना तैयार करने के दौरान नमूना अपघटन या अशुद्धियाँ, नमूना शीशी सील नहीं, नमूना या विलायक अस्थिरता, गलत नमूना तैयार करना, नमूना इंजेक्शन समस्याएं, गलत आंतरिक मानक तैयारी

ख़राब परिशुद्धता के संभावित कारण:

गलत शिखर एकीकरण, इंजेक्शन या इंजेक्टर समस्याएं, नमूना अपघटन या नमूना तैयार करने के दौरान पेश की गई अशुद्धियाँ, क्रोमैटोग्राफ़िक समस्याएं, ख़राब डिटेक्टर प्रतिक्रिया